實(shí)驗(yàn)案例
2020/12/21 12:03:21
全自動組織研磨機(jī)研磨破碎酵母細(xì)胞實(shí)驗(yàn)-上海凈信
來源：上海凈信
多年的生化、遺傳學(xué)及分子分析研究所得的大量研究結(jié)果，使酵母成為生物制藥研究者首選的模式生物系統(tǒng)和工具。因此，酵母成為普遍的基因表達(dá)研究和重組蛋白的常見載體。盡管研究用的酵母種屬有多種，包括畢赤酵母屬、漢遜酵母屬和德巴利氏酵母屬，但常用的還是酵母菌屬。
使用傳統(tǒng)的酶分解法通常很難從細(xì)胞中提取完整的酵母mRNA和細(xì)胞內(nèi)蛋白。裂解酶通常是粗制備，包含的RNA酶和蛋白酶不僅會破壞細(xì)胞壁，還會破壞目標(biāo)分子。而且，酶裂解出原生質(zhì)體通常需要加入去垢劑，而去垢劑會造成多種蛋白質(zhì)失活。因此，機(jī)械裂解或破壞酵母細(xì)胞通常需要釋放一些小分子。
1、破碎前的準(zhǔn)備：
0.1g菌體（本實(shí)驗(yàn)以0.1g菌體為例）；鋼珠；全自動組織研磨機(jī)（選用品牌上海凈信科技Tissulyser-24）；研磨罐。
2、研磨：
0.1g菌體加入30ML PBS溶液，混勻后用移液器均勻滴入液氮中，收集液氮凍住的小球，將小球放入上海凈信科技預(yù)冷過的研磨罐中，調(diào)整頻率，震蕩時間。取下研磨罐再次放入液氮預(yù)冷取出來再次上機(jī)研磨
研磨現(xiàn)場圖
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